双荧光定量RT-PCR方法及其在柯萨奇病毒A6和A10检测中的应用
崔大为谢国良杨先志楼建洲陈瑜
[摘要]本研究的目的是提供快速，准确的检测由柯萨奇病毒A6和A10引起的手足口病的方法。
方法使用实时双重定量RT-PCR一步，在同一反应管中使用高特异性柯萨奇病毒A6和柯萨奇病毒A10引物以及荧光标记的探针检测患者粪便样本中的柯萨奇病毒检测到。A10型核酸。
结果成功建立了柯萨奇A6和A10病毒的RT-PCR检测和标准定量曲线。
实验结果表明，该检测方法具有特异性，与肠道病毒71型，柯萨奇病毒A16，柯萨奇病毒A2，柯萨奇病毒A5，柯萨奇病毒B1，柯萨奇病毒B3，Eck病毒30，甲型流感病毒，呼吸道合胞病毒等兼容博卡病毒阳性核酸，无交叉反应。该方法的检测灵敏度很高，分别达到102和102拷贝/毫升；合成的柯萨奇病毒A6片段（107拷贝/毫升）和合成的柯萨奇病毒A10片段（107拷贝/毫升），并按数字进行了校准。稀释拷贝（拷贝/ ml），稀释至指定浓度的阳性核酸，重复测试液体，变异系数小于1。
38％
结论该方法可同时检测柯萨奇A6和A10病毒，具有高灵敏度，特异性和重现性，可用于急诊诊断由柯萨奇A6和A10病毒引起的暴发。，快速检测，临床诊断和研究手足口病的流行病学。
[作者]：分子江大学医学院第一医院分子实验室[类别]：R440
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